Elisa試劑盒為雙抗體夾心法檢測(cè)抗原RBD蛋白，酶標(biāo)板采用高親和力抗RBD蛋白抗體作為包被物，檢測(cè)時(shí)酶標(biāo)板孔加入待檢樣品或標(biāo)準(zhǔn)品(哺乳動(dòng)物重組表達(dá)RBD蛋白)，再加入生物素化抗RBD蛋白抗體,反應(yīng)后加入鏈霉親和素HRP，較后加入單組份TMB底物液。 如果待檢樣品中含有RBD蛋白，TMB底物液在HRP催化下顯色，加入終止液終止顯色后，在酶標(biāo)儀OD450/OD630讀取吸光值，吸光值大小與待檢測(cè)樣品中RBD蛋白濃度呈正相關(guān)，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品濃度/吸光值繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線，可計(jì)算出待檢樣品中RBD蛋白含量。
 

　　Elisa試劑盒的樣品收集:
 

　　1.血清：全血樣品于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后于1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，收集血液的試管應(yīng)為一次性的無(wú)熱原，無(wú)內(nèi)毒素試管。
 

　　2.血漿：抗凝劑推薦使用EDTA-Na2，樣品采集后30分鐘內(nèi)于1000×g離心15分鐘，取上清即可檢測(cè)。避免使用溶血，高血脂樣品。
 

　　3.組織勻漿：用預(yù)冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織，去除殘留血液(勻漿中裂解的紅細(xì)胞會(huì)影響測(cè)量結(jié)果)，稱重后將組織剪碎。將剪碎的組織與對(duì)應(yīng)體積的PBS(一般按1:9的重量體積比，比如1g的組織樣品對(duì)應(yīng)9mL的PBS，具體體積可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要適當(dāng)調(diào)整，并做好記錄。推薦在PBS中加入蛋白酶抑制劑)加入玻璃勻漿器中，于冰上充分研磨。為了進(jìn)一步裂解組織細(xì)胞，可以對(duì)勻漿液進(jìn)行超聲破碎，或反復(fù)凍融。較后將勻漿液于5000×g離心5~10分鐘，取上清檢測(cè)。
 

　　4.細(xì)胞培養(yǎng)上清：取細(xì)胞培養(yǎng)上清于1000×g離心20分鐘，除去雜質(zhì)及細(xì)胞碎片。取上清檢測(cè)。
 

　　5.其它生物樣品：1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)。
 

　　6.樣品應(yīng)清澈透明，懸浮物應(yīng)離心去除。
 

　　7.樣品收集后若在1周內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的可保存于4℃，若不能及時(shí)檢測(cè)，請(qǐng)按一次使用量分裝，凍存于-20℃(1個(gè)月內(nèi)檢測(cè))，或-80℃(6個(gè)月內(nèi)檢測(cè))，避免反復(fù)凍融。
 

　　8.如果您的樣品中檢測(cè)物濃度高于標(biāo)準(zhǔn)品較高值，請(qǐng)根據(jù)實(shí)際情況，做適當(dāng)倍數(shù)稀釋(建議先做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定稀釋倍數(shù))。
 

　　Elisa試劑盒的洗滌方法:
 

　　1.自動(dòng)洗板機(jī)：每孔加入洗滌液350μL，注入與吸出間隔60秒。
 

　　2.手工洗板：甩盡孔內(nèi)液體，在潔凈的吸水紙上拍干，每孔加洗滌液350μL，浸泡1-2分鐘，吸去(不可觸及板壁)或甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體，在厚的吸水紙上拍干。