免疫組化抗原修復(fù)注意事項(xiàng)

1、pH的應(yīng)用范圍及選擇

抗原修復(fù)液的pH非常重要，有效的抗原修復(fù)pH要比修復(fù)液的化學(xué)成分更重要，同樣的修復(fù)液隨著pH的升高染色的強(qiáng)度逐漸增強(qiáng)，但*pH范圍為6.0-10.0。目前大家*的的抗原修復(fù)液是pH6.0的檸檬酸鹽緩沖液和pH8.0的EDTA緩沖液。作為通用修復(fù)液堿性pH的修復(fù)液要比酸性的有效，而對固定很長時(shí)間舊的存檔組織，酸性pH的修復(fù)液則優(yōu)于堿性的修復(fù)液。

2、抗原修復(fù)時(shí)應(yīng)選擇*溫度

70-90℃的溫度對未經(jīng)固定的蛋白質(zhì)可發(fā)生變性，但經(jīng)福爾馬林固定的蛋白質(zhì)，溫度必須達(dá)到92℃以上方能使其變性。研究結(jié)果顯示，溫度為92-98℃是合適的，95℃效果。

3、抗原修復(fù)液必須遵循自然降溫規(guī)律，否則效果不好或達(dá)不到抗原修復(fù)的目的

抗原修復(fù)持續(xù)時(shí)間過后，取出放于室溫中讓其慢慢地降溫，不能為了爭取時(shí)間，強(qiáng)行用冰塊或冷水使其降溫。這是因?yàn)楫?dāng)高溫中的抗原蛋白分子鏈脫離了其他的束縛或聯(lián)結(jié)，要有一個(gè)自然環(huán)境讓其自然放松下來，隨著溫度的降低，它們會慢慢地恢復(fù)原來的形態(tài)和構(gòu)型。

4、盡量使用足量的抗原修復(fù)液

應(yīng)用于抗原修復(fù)的液體，一定要充足，防止切片干涸。應(yīng)用大量的抗原修復(fù)液時(shí)，由于它的量較大，可延緩液體的沸騰時(shí)間，增加切片受微波輻射的量，對抗原修復(fù)將達(dá)到*。